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扇脉杓兰AFLP反应体系的建立
作者: 李全健 [1,2] ; 王彩霞 [2] ; 田敏 [2] ; 李翠新 [1]
关键词: 扇脉杓兰 基因组DNA 扩增片段长度 多态性
摘要：通过SDS法、高盐低pH法、常规CTAB法、高盐CTAB法和改良CTAB法提取扇脉杓兰（Cypripedium japonicum Thunb.）幼叶基因组DNA,并对其AFLP反应体系进行了优化。结果表明：改良CTAB法所提取的DNA电泳条带清晰无污染,A260和A280比值在1.8～2.0,用限制性内切酶酶切后条带均一,酶切时间以4 h为宜。最终确定50μL PCR反应体系的最佳条件为：预扩增产物稀释20倍4μL,dNTP（2.5 mmol/L）3μL,Mg2（＋25 mmol/L）4μL,MseⅠ（10μmol/L）和EcoRⅠ（10μmol/L）各1.5μL,Taq DNA聚合酶（5 U/μL）0.3μL。